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              流式細胞儀的操作步驟和使用注意事項

              發布時間:2022-12-10

              閱讀:313

                 流式細胞儀是儀器設備中的生物器械,屬于分子生物范疇。 流式細胞儀已廣泛應用于:免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。具體的說,(1)免疫學用于:研究細胞周期或DNA倍體與細胞表面受體及抗原表達的關系; 進行免疫活性細胞的分型與純化; 分析淋巴細胞亞群與疾病的關系; 免疫缺陷病如艾滋病的診斷; 器官移植后的免疫學監測等。(2)生物學中的。
                流式細胞儀是以流式細胞術為核心技術,集光學、電子學、流體力學、細胞化學、生物學、免疫學以及激光和計算機等多門學科和技術于一體的先進科學技術設備。是現代科學研究中的先進儀器之一,被譽為實驗室的”CT”。流式細胞儀主要由液流系統、光路系統、檢測分析系統三部分組成。部分儀器在電子系統中具有分選功能,通過對粒子進行充電和偏轉,達到對細胞的分選并分析的目的。
                操作步驟:
                1.  單細胞懸液的制備:將1x105~1x107的細胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘,棄上清;加入FACS緩沖液100 ul 懸浮細胞。
                2.  封閉細胞表面Fc受體:在步驟1中加入Fc受體抗體0.5 ul(0.5 mg/ml),水浴3分鐘。
                3.  細胞與熒光抗體結合:在步驟2中加入熒光抗體1 ul(0.5 mg/ml),水浴30分鐘。
                4.  洗細胞去除游離的熒光抗體:在步驟3中加入FACS緩沖液350 ul,輕輕混勻,3000 r/min,離心5分鐘,棄上清,重復步驟(4)2次。
                5.  上樣前處理:取100 ul 儀器緩沖液加入步驟(4)獲得的細胞沉淀中,輕輕混勻懸浮細胞,將細胞懸液移入FACS專用管中,準備進行儀器檢測和分析。
                注意事項
                1.  減少非特異熒光染色
               ?。?)細胞的活性和狀態:流式細胞儀不但可探測細胞表面的熒光,也可探測細胞內的熒光。因此,如果要檢測細胞表面的分子,一定要保證細胞的活性,還應盡可能保持細胞靜止,通常在4度進行操作。否則,熒光抗體進入死細胞內,會產生非特異結果。
               ?。?)封閉抗體的應用是bi不可少的,因為大多數的免疫細胞表面都表達有Fc-R。細胞與抗體相互作用后,一定要用FACS緩沖液洗2~3次,以除去游離的抗體。
                2.  單染色時以FCS常用,FITC標記抗體熒光比較穩定而且價格合適。
                3.  如果同時要檢測兩種以上的分子,一定要選擇不同波長的熒光所標記的抗體。
                流式細胞儀是一種能夠探測和計數以單細胞液體流形式穿過激光束的細胞檢測裝置,由于在檢測中使用的細胞標志示蹤物質為熒光標記物,因此,用來分離、鑒定細胞的流式細胞儀有被稱為熒光激活細胞分類儀,是分離和鑒定細胞群及亞群的一種強而有力的應用工具。
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