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              蛋白提取試劑盒的使用方法

              發布時間:2023-02-10

              閱讀:120

                 本試劑盒提供全套試劑,適用于從各種哺乳動物細胞(原代或傳代細胞、貼壁或懸浮細胞等)和各種實體軟組織(如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織)提取總蛋白。提取過程簡單方便,無須超速離心機。本試劑盒含有的du特變性劑能夠溶解細胞膜包括細胞質膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
               
                使用方法:
                A. 細胞總蛋白提取
                1. 每500 μl裂解液,在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
                2. 取5-10×106個細胞,在4℃,500 g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集細胞。
                3. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
                4. 每5×106個細胞中加入500 μl冷的裂解液,混勻后,在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
                5. 在4℃,16,000 g條件下離心15分鐘。
                6. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
               
                B. 組織總蛋白提取
                1. 每500 μl裂解液,在使用前數分鐘內加入5 μl PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
                2. 取100 mg組織樣本剪碎,加入裂解液,用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
                3. 將組織勻漿吸入另一預冷的干凈離心管中,在4℃,16000 g條件下離心5分鐘。
                4. 快速將上清轉移至另一預冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
                上述蛋白提取物可立即用于后續實驗,或分裝后于-80℃冰箱保存備用。
                注意事項:1. 實驗過程中的所有試劑可冰上預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。
                2. 整個過程須保持樣品處于低溫狀態。
                3. 蛋白濃度用BCA法測定 。
                以上就是蛋白提取試劑盒的使用方法,以上知識僅供參考,希望對您有所幫助!
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